@e6b267452967 我的是移码突变
CRISPR-Cas9基因编辑5--不可或缺的sgRNA活性预实验前言： 大家都知道CRISPR-Cas9有脱靶效应，并且每个sgRNA的效率都不一样的，因此在做正式实验之前，我们要验证sgRNA的效率，之后优中选优。还是那句话，同样的目的...
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@47d051d67d1b 如果是我的话，我会先查文献，在文献中能有答案。同时有一个叫做depmap的网站，你可以去下载里面的数据来进行查询。不过一般还是看文献哦。如果从未有记录，从未有报道的话。你可以尝试查查有没有这个细胞的全基因组测序数据，下载下来自己分析，或者全外显子测序也可以。如果都没有，那你可以：1. 自己送WGS/WES测序；2. 自己PCR这段序列，送桑格测序。其余办法我尚未想到，希望能帮到你。
细胞周期学习笔记，越想简单，却越复杂的一次学习
看文献的时候发现很多细胞周期的内容，因此想要简单了解一下细胞周期的内容，但是当我开始看相关内容时，发现内容越来越复杂。若只是了解细胞周期的大概分布不算什么，最重要的是该了解细...
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@金牛座_14dd 不好意思，这个超出了我的经验范围，我不是很懂呢，不好意思哦~
终于把CRISPR-Cas9基因编辑系统这篇文章看完个大概了。
Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system 这篇文章真的看了好久，就算一开始秉承着不求甚解的精神都看不下去，有太多的专业背...
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@VvO 其实我可能不太清楚你的操作是什么，因为我是转入到细胞中，在细胞中完成切割，然后提取gDNA进行PCR，把PCR产物跑胶，切胶回收之后再做切割活性检测，就是T7EI酶切实验。
不知道你的操作过程是否跟我的一样，如果是一样的，DNA模板是PCR切胶回收过后的，比较纯并且量也大，不太可能会出现消失的情况哦。CRISPR-Cas9基因编辑5--不可或缺的sgRNA活性预实验
前言： 大家都知道CRISPR-Cas9有脱靶效应，并且每个sgRNA的效率都不一样的，因此在做正式实验之前，我们要验证sgRNA的效率，之后优中选优。还是那句话，同样的目的...
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@e6b267452967 不好意思这是我很久之前查的，图中截图就是我在该公司截的，但是具体哪个公司忘了，现在再搜索我也搜索不到了，只看到abcam有一株：Human PTEN knockout A549 cell line (ab286704) 显示19 bp deletion。或许像你说的那样，曾经公司标注，之后取消了这些信息呢。
CRISPR-Cas9基因编辑1--背景介绍及gRNA设计（上）
简介和前期文章 我对之前的所有教程进行了再次详细的总结 前言： 每当我们接触新事物时，都忍不住问如下图所示之哲学三问（当然有时候问的是，这是什么？可以吃吗？怎么做？）： 由于...
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@VvO 其实我在做sgRNA体外活性验证的时候也遇到过很低的条带，原因就是可能off-target很多，并且造成了很多种切割结果，导致条带弥散。最好还是一次多试几个sgRNA，这样能尽量选择合意的，以免后面白做，毕竟我们做一次不容易啊。希望能帮到你。
CRISPR-Cas9基因编辑不只是剪开DNA这么简单
前言 我只是搬运工，这部分内容我参考的内容有：CRISPR Editing is All About DNA Repair MechanismsCRISPR-guideMME...
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@98cb69c247f1 直接跑哦，不需要过滤哦~
CRISPR-Cas9基因编辑4--确定Cas9质粒构建成功+漂亮的质粒转染
简介和前期文章 我对之前的所有教程进行了再次详细的总结CRISPR-Cas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计（上）[https://www.jianshu.com/p/e5c...
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一文解决Cellphonedb单细胞互作分析及可视化作图（1）CellPhoneDB作为出镜率很高的细胞互作分析工具，也是大家公认的。网上有很多教程，按理说在自己单细胞系列也应该出一个教程，但是由于CellPhoneDB是基于pytho...
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细胞间通讯教程|| cellphonedb 及其可视化细胞配受体通识以及常见细胞分泌信号通路[https://www.jianshu.com/p/df4721d29a91]CellChat：细胞间相互作用分析利器[https:/...
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@一直在努力的科研小白 没有特殊加什么，就是10% FBS的1640，我们组养细胞连双抗偶读不加，或许你还要查查有无支原体污染之类的。我们THP-1状态是比较不错的
CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录（6）正式转染+单克隆细胞筛选
前期记录 先确定目标基因CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录（1）然后对目的基因进行背景调查CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录（2）磨刀不误砍柴工设计sgRNA及引...
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@一直在努力的科研小白 由于我没养过这个巨噬细胞，所以不是特别了解。不过首先要确定你敲除的这个基因不会影响细胞增殖，不是一个生存必须的基因。其次只能说扩大实验范围，我们课题组在挑THP-1单克隆的小伙伴也表示这个细胞一个96孔板挑下来也只能挑到十个左右而已，看来这个细胞本身个头就是特别小又很脆弱的样子呢。
CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录（6）正式转染+单克隆细胞筛选
前期记录 先确定目标基因CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录（1）然后对目的基因进行背景调查CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录（2）磨刀不误砍柴工设计sgRNA及引...
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@RAVEN_9dc5 有可能哦~
不想再用慢病毒了，我还有什么别的选择吗？piggyBac transposon
慢病毒可快速、高效的将目的基因整合到宿主细胞基因组，非常适合用于构建稳转细胞株。但慢病毒也有缺点，即使是稳转细胞株，可能会随着传代次数的增加而慢慢丢失干扰或者过表达的效率。其...
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@梁蛋蛋 太辛苦了~终于可以开始啦~~~！！！！恭喜恭喜！！！！
CRISPR-Cas9基因编辑6--挑单克隆技术哪家强
前言： 挑选到满意的sgRNA之后，就要开始正式实验，而正式实验中细胞转染部分我则不会再讲，直接到最关键的部分：挑取单克隆。 实验正文 1. 实验准备 常规试剂、仪器：转染试...
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@实验小菜鸡 如果你的敲除成功是片段变小的话，那300-400处没有条带，可能提示sgRNA活性不够。
CRISPR-Cas9基因编辑5--不可或缺的sgRNA活性预实验
前言： 大家都知道CRISPR-Cas9有脱靶效应，并且每个sgRNA的效率都不一样的，因此在做正式实验之前，我们要验证sgRNA的效率，之后优中选优。还是那句话，同样的目的...
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@梁蛋蛋 太可怜了，啥细胞呀，不好养活吗？
CRISPR-Cas9基因编辑6--挑单克隆技术哪家强
前言： 挑选到满意的sgRNA之后，就要开始正式实验，而正式实验中细胞转染部分我则不会再讲，直接到最关键的部分：挑取单克隆。 实验正文 1. 实验准备 常规试剂、仪器：转染试...
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@梁蛋蛋 密度高一点试试，T25太大了，不如就用六孔板养着，平时普通的实验，六孔板也够了
CRISPR-Cas9基因编辑6--挑单克隆技术哪家强
前言： 挑选到满意的sgRNA之后，就要开始正式实验，而正式实验中细胞转染部分我则不会再讲，直接到最关键的部分：挑取单克隆。 实验正文 1. 实验准备 常规试剂、仪器：转染试...
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@b2e3219b1c5d 如果不长的话，直接找公司合成吧，同源重组也有错配的，好大一番动静下来，还不一定能做出来呢。如果你的定点附近有一些酶切位点，我觉得可以用Gibson assembly的方法来完成。你在snap gene里面可以直接设计的。至于你老师说的那种有很长同源臂的同源重组，这个同源臂你也得合成，然后加入到外源基因2的质粒上，你还要构建非常久的质粒。时间上划不来，还是觉得你直接合成这段融合基因序列，也不会太费钱。
CRISPR-Cas9基因编辑4--确定Cas9质粒构建成功+漂亮的质粒转染
简介和前期文章 我对之前的所有教程进行了再次详细的总结CRISPR-Cas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计（上）[https://www.jianshu.com/p/e5c...
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@多多 可以多培养几天哟
CRISPR-Cas9基因编辑6--挑单克隆技术哪家强
前言： 挑选到满意的sgRNA之后，就要开始正式实验，而正式实验中细胞转染部分我则不会再讲，直接到最关键的部分：挑取单克隆。 实验正文 1. 实验准备 常规试剂、仪器：转染试...