Journal: New Phytologist
First Published: June 01, 2022
Corresponding author：陕西师范大学王国栋
本文发现在芽再生阶段，CLE1-CLE7能够被强烈诱导表达，并通过CLV1和BAM1抑制WUS的表达，调控芽再生
背景
- 体外诱导再生分为两步：一是在富含生长素的callus-induction media (CIM)上获得愈伤组织和多能性pluripotent；二是转移到富含细胞分裂素的shoot-induction media (SIM)上诱导器官从头再生
- CLE1-CLE7在系统发育树上比较接近，受到氮饥饿的诱导，依赖于CLV1通路抑制侧根的起始和生长
- 在SAM中，CLV3被CLV1等受体复合体感知，限制WUS的表达范围，WUS作为stem cell-promoting factor，又可以促进CLV3的表达，从而形成负反馈调节
- 前期报道表明，BAM1-BAM3也贡献于WUS介导的SAM稳态
- 35S过表达CLE1-CLE7，表型：SAM消耗，类似于wus或者过表达CLV3的表型
- 用CLV3的启动子表达CLE6和CLE7，能构完全回补clv3的表型
Results
系统进化树上，CLE1-CLE7在一个分支上，与之前报道一致，cle花期提早，过表达CLE1-7花期推迟。
并且过表达CLE1-CLE7表型与过表达CLV3的表型一致，均类似wus 突变的表型，并且CLE1、4、6、7过表达能完全回补clv3，这表明，CLE1-7可能功能冗余性地参与CLV3-CLV1-WUS通路。
敲除CLE1-CLE7 基因，cle1-cle7 的SAM没有表型，clv3 单突就有严重表型。进一步得到八突，发现clv3cle1-7 与clv3无差异。
总之，正常生长条件下，cle1-cle7敲除之后，单敲和7突都没表型
2、在de novo shoot regeneration中，CLE1-7被强烈诱导
cle1-cle7 单突对芽再生几乎无影响，表明其功能冗余性；在7突cle1-7sep 和8突clv3cle1-7oct 中外植体表现出相当的再生潜力，远高于WT和 clv3 外植体
说明cle1-7突变体有促进芽再生的表型
CLE1-7编码4个不同的CLE成熟肽？【10nM接近生理浓度，展示的处理浓度是5uM或10uM】
外源施加的抑制作用：CLE5p 、CLE6p较弱，CLE2p强nM级别，剩下CLE1/3/4/7p的在nM级别有用但是不明显，明显的是在uM级别。
自身启动子驱动CLE4和CLE7的前体表达，也能抑制芽再生。
表明外源施加和内源表达的CLE1-7均贡献于芽再生，但是不影响愈伤的形成
即【CLE过表达抑制芽再生，敲除之后，促进芽再生】
3、CLE1-CLE7在CIM阶段被诱导，在芽再生阶段动态表达
利用pCLE:GUS来看表达谱，除5外，其他的CLE1-7均在CIM被强烈诱导表达。
从CIM转移到SIM后，pCLE4:GUS 和pCLE7:GUS逐渐被限制在突起的位置。
说明：时空表达对应芽再生过程
4、CLE1-CLE7抑制芽再生依赖于CLV1和BAM1
CLV1在CIM时不存在，在SIM时期只在SAM形成的突起中表达（之前的报道）。而pBAM1:GFP显示，BAM1在CIM和SIM均有强烈广泛的表达。
CLE1-7处理拟南芥，看主根长度实验
施加CLE1-7，出现短根，但是在bam1-3 和 bam1-4 clv1-101 突变体中，变得不敏感了，但是在clv1-101中为什么还是敏感的呢？【是不是对于主根抑制上，BAM1作为主要的受体】也就是缺失BAM使得根对CLE1-7的抑制作用的感知降低。
进而表明，CLE1-7对根长的抑制依赖于BAM1
再来看，怀疑的受体是否贡献于芽再生，有没有表型：
bam1-3,单突、clv1-101单突和bam1-4 clv1-101双突，均展示出强烈的芽再生能力；并且对突变体进行CLE1-7的外源施加，在上述突变体中，CLE不能发挥抑制芽再生的作用，说明CLV1和BAM1贡献于CLE1-7介导的芽再生。BAM2和BAM3不贡献。
5、CLE-BAM1/CLV1通过限制WUS表达，来调控芽再生
通过施加CLEp来看pWUS:GUS表达的变化 ，以及QRT检测cle1-7中WUS转录水平上升。
通过这两个实验，推断CLE1-7调控芽再生可能是通过限制下游WUS的表达来实现的。
