A novel ceRNA regulatory networkinvolving the long noncoding NEAT1, miRNA-466f-3p and its mRNA target in osteoblast autophagy and osteoporosis 一种新的ceRNA调控网络，涉及成骨细胞自噬和骨质疏松症中的长非编码NEAT1、miRNA-466f-3p及其mRNA靶点
骨质疏松症（OP）是一种以骨组织体积减少为特征的全身代谢紊乱。据报道，lncRNA可作为几种人类疾病的调节因子。具体而言，lncRNA核旁啄组装转录物1（NEAT1）参与破骨细胞和骨髓间充质干细胞的增殖、分化和凋亡，并调节OP的发生和发展。然而，NEAT1与成骨细胞自噬的关系及其机制尚不清楚。使用LC3和P62的蛋白质印迹来评估流体剪切应力（FSS）对MC3T3-E1成骨细胞自噬的影响。对负载和不负载FSS的成骨细胞进行总转录组测序和生物信息学分析。采用qPCR检测NEAT1在OP骨组织和成骨细胞中的表达。进行RNA-FISH以研究lncRNA NEAT1和miR-466f-3p在MC3T3-E1成骨细胞中的定位。在体外，进行蛋白质印迹、透射电子显微镜（TEM）、免疫荧光（IF）染色和qPCR来验证NEAT1、miR-466f-3p和HK2的生物学功能。随后，我们进行了生物信息学分析和双荧光素酶报告基因测定，以确定NEAT1、miR-466f-3p和HK2之间的关系。此外，还对成骨细胞进行了挽救试验，以阐明NEAT1/miR-466f-3p/HK2信号通路的调控网络。在体内，使用OVX小鼠模型来研究si-NEAT1对OP小鼠自噬的影响。收集股骨远端和血清进行进一步的显微CT分析、血液生物化学和苏木精-伊红和茜素红染色（ARS）。免疫组织化学（IHC）检测LC3和HK2的蛋白表达。在暴露于FSS的OP组织和成骨细胞系中，NEAT1表达上调。敲除NEAT1在体外和体内抑制自噬。进一步的研究表明，NEAT1通过其对miR-466f-3p的竞争性内源性RNA作用正向调节HK2的表达。此外，我们发现NEAT1/miR-466f-3p/HK2轴调节成骨细胞的自噬。敲低NEAT1通过miR-466f-3p/HK2信号通路抑制成骨细胞的自噬，这可能为绝经后OP的新分子治疗靶点提供新的思路。关键信息：•流体剪切应力（FSS）可以促进成骨细胞自噬并进行转录组测序。•NEAT1在骨质疏松症中过表达，可调节成骨细胞自噬。•在骨质疏松症中，lncRNA NEAT1的敲除通过吸收miRNA-466f-3p和靶向HK2来抑制成骨细胞自噬。
其中体内RNA转染是通过Entranster invivo –RNA来实现。
