细胞计数

  1. 吸弃培养基中原培养基

  2. 用PBS清洗2次

  3. 加入1ml 0.25%胰酶进行消化

  4. 待消化完全后,继续加入1ml含10%FBS的1640培养基终止消化

  5. 吹打混匀,移入15ml离心管中

  6. 800r/min,离心5min,弃上清液

  7. 加入1ml含10%FBS的1640培养基重悬细胞

  8. 吸取10ul细胞悬液至1.5ml离心管中,加入90ul含10%FBS 的1640培养基,吹打混匀

  9. 用95%乙醇擦拭干净细胞计数板及盖玻片,盖玻片盖在计数板上方

  10. 吸取10ul细胞悬液缓慢加入(沿计数板边缘),避免产生气泡

  11. 低倍镜下观察计数板,确认细胞平均分布,无气泡
    高倍镜下计数,计算四角大方格内的细胞数,压线细胞只算左侧和上方

  12. 计算(细胞密度):稀释后细胞数/ml = 四大格细胞总数/4 *10000
    (1ml是因为加了1ml的含10%FBS的1640培养基)

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