非特异性扩增是可能严重影响PCR性能的主要问题之一，导致以下一种或多种结果：
目标扩增子产量低。
目标扩增子的灵敏度下降。
下游应用效果不佳。
非特异性扩增的常见来源是由DNA聚合酶引起的错误引导靶标的延伸和引物二聚体的形成。
研究人员用来避免非特异性扩增的一种解决方法是在冰上制备PCR反应混合物。降低温度有助于保持DNA聚合酶的活性低，但是在PCR开始之前仍然可能发生不需要的产物的合成。
另一种解决方案是使用热启动DNA聚合酶。热启动技术和相关修饰在室温下抑制DNA聚合酶活性，有效地防止假性非特异性扩增。
热启动技术如何工作？
热启动PCR通常使用抗体、亲和体或适体等酶修饰剂。其中最常用的两种方法是化学修饰和抗体。虽然它们都能抑制室温下的聚合酶活性，但两者之间存在一些关键差异。
热启动技术有什么好处？
阻止引物与低同源性（引导错误）的模板序列结合。
在PCR开始之前防止引物在反应设置期间彼此结合（引物 – 二聚体形成）。
提高所需目标片段的灵敏度和产量。
热启动聚合酶能够在室温下进行反应设置而不会牺牲特异性，使得更容易运行大量反应或使用自动液体处理平台进行PCR。
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文章来源：http://nambou1-bio.cn/news/jswz/pcr-rqd/
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