对于各位小伙伴来说,无论是自己独立进行高通量测序数据分析,还是解读公司的测序结果,一个必须要面对的情况就是高通量测序数据的质量控制,又称Quality Control。照顾到有些不会代码的同学,今天我们不仅将会介绍一个具体软件的使用说明,还会给大家附图解读。希望各位小伙伴多多点赞和关注。
今天我们要推荐的软件是fastp,一个包含了质控,过滤,校正以及预处理的fastq文件处理软件。相比于传统的Fastqc+
Trimmomatic组合,该软件的效率简直更高了有没有?而且自2018年发表后,已经达到了惊人的369次引用。
闲言少叙,我们今天主要介绍两部分。
1. fastp的使用。
1.1下载。
如果下载了conda的同学,可以使用如下命令
conda install -c bioconda fastp
使用源代码安装
# 从github下载
git clone https://github.com/OpenGene/fastp.git# 切换到该文件目录,安装
cd fastp
make
sudo make instal
1.2 使用
单端测序数据,
以下默认该软件添加到了环境变量,如果未添加,请使用绝对路径。
fastp -i input.fq -o output.fq
双端测序数据
fastp -i input.R1.fq -o output.R1.fq -I input.R2.fq -O output.R2.fq
# 如果为了节省空间,可以使用如下命令
fastp -i in.R1.fq.gz -I in.R2.fq.gz -o out.R1.fq.gz -O out.R2.fq.gz
#批量处理的情况下,为了防止文件的覆盖,使用如下的命令
ls *_1.fastq | while read id; do "fastp -i $id -o ${id%_*}.1.fastp.fq -I ${id%_*}_2.fastq -O ${id%_*}_2.fastp.fq -h ${id%_*}.html "; done
该软件的常用功能基本上已经介绍完了,其他的例如接头、滑窗处理、过滤短序列、polyG剪切等,感兴趣的小伙伴可以自己查询说明书。
2. 结果解读
该软件的结果文件包括如下四个,分别双端过滤后的两个文件,即过滤后的高质量reads;日志文件,以及html文件。
我们重点看html文件,这是网页版的,更可视化。
结果第一项是summary,可以看到reads长度、重复率等,以及过滤前的reads数目,大小和过滤后的,包括Q30值等重要信息。
接头信息,fastp 软件会自动进行接头信息的处理,特别是对双端数据处理的更好。
重复率
插入片段的评估
fastp还对5个碱基长度的k-mer进行了统计。在k-mer统计表中,背景越深,则表示该k-mer出现频数越多,可能存在异常情况。
过滤后的质量值,分碱基统计,将鼠标放置到特定的线条上即可显示数值。
过滤后的read1碱基含量。
fastp作为最近才出的一个质控,过滤以及修剪软件,可以说功能还是很强大的,今天我们只是简单的介绍了常用的方法,手边有测序数据的同学可以看看自己的数据质量怎么样。欢迎大家留言、评论,以及讨论!