植物基因组学-fastp进行高通量测序数据的质控

对于各位小伙伴来说,无论是自己独立进行高通量测序数据分析,还是解读公司的测序结果,一个必须要面对的情况就是高通量测序数据的质量控制,又称Quality Control。照顾到有些不会代码的同学,今天我们不仅将会介绍一个具体软件的使用说明,还会给大家附图解读。希望各位小伙伴多多点赞和关注。

今天我们要推荐的软件是fastp,一个包含了质控,过滤,校正以及预处理的fastq文件处理软件。相比于传统的Fastqc+

Trimmomatic组合,该软件的效率简直更高了有没有?而且自2018年发表后,已经达到了惊人的369次引用。

闲言少叙,我们今天主要介绍两部分。

图1.引用量

1. fastp的使用。

1.1下载。

如果下载了conda的同学,可以使用如下命令

conda install -c bioconda fastp

使用源代码安装

# 从github下载
git clone https://github.com/OpenGene/fastp.git

# 切换到该文件目录,安装

cd fastp

make

sudo make instal

1.2 使用

单端测序数据,

以下默认该软件添加到了环境变量,如果未添加,请使用绝对路径。

fastp -i input.fq -o output.fq

双端测序数据

fastp -i input.R1.fq -o output.R1.fq -I input.R2.fq -O output.R2.fq

# 如果为了节省空间,可以使用如下命令
fastp -i in.R1.fq.gz -I in.R2.fq.gz -o out.R1.fq.gz -O out.R2.fq.gz


#批量处理的情况下,为了防止文件的覆盖,使用如下的命令

图2 测试数据

ls *_1.fastq |  while read id; do "fastp -i $id -o ${id%_*}.1.fastp.fq -I ${id%_*}_2.fastq -O ${id%_*}_2.fastp.fq  -h ${id%_*}.html  "; done

该软件的常用功能基本上已经介绍完了,其他的例如接头、滑窗处理、过滤短序列、polyG剪切等,感兴趣的小伙伴可以自己查询说明书。

2. 结果解读

该软件的结果文件包括如下四个,分别双端过滤后的两个文件,即过滤后的高质量reads;日志文件,以及html文件。

图3.测试数据的结果

我们重点看html文件,这是网页版的,更可视化。

结果第一项是summary,可以看到reads长度、重复率等,以及过滤前的reads数目,大小和过滤后的,包括Q30值等重要信息。

图4.结果的summary

接头信息,fastp 软件会自动进行接头信息的处理,特别是对双端数据处理的更好。

图5.接头信息

重复率

图6.重复率

插入片段的评估

图7.插入片段的评估

fastp还对5个碱基长度的k-mer进行了统计。在k-mer统计表中,背景越深,则表示该k-mer出现频数越多,可能存在异常情况。

图8.kmmer统计量

过滤后的质量值,分碱基统计,将鼠标放置到特定的线条上即可显示数值。

图9.过滤后的reads1质量值

过滤后的read1碱基含量。

图10.过滤后的reads1的碱基含量

fastp作为最近才出的一个质控,过滤以及修剪软件,可以说功能还是很强大的,今天我们只是简单的介绍了常用的方法,手边有测序数据的同学可以看看自己的数据质量怎么样。欢迎大家留言、评论,以及讨论!

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