CCK8

预实验:摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间

  1. 在 96 孔板中接种单细胞悬液 (100 μL/孔) ,放在孵箱中培养
    16-24 小时(目的让细胞贴壁,悬浮的细胞是圆形,贴壁的是梭形或者多边性;需用显微镜观察)。
  • 可以先加50ul培养基,再加细胞悬浮液50ul
  1. 在每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡) 。
    沿着孔壁加
    如果有气泡,用针头戳破
  2. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时(1h测一次,2h测一次,3h测一次,4h测一次;寻找最佳时间点控制od值在1左右,随着反应时间增加,od越大
    孵育成功后采集0点数据
  3. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
    新建~振板 10s~ 检测,选择450nm*


    image.png

蓝色只加pbs(无细胞)!(还剩6*10)
调零孔:只加培养基,无细胞
对照孔:nc
实验组:siRNA
(每一列加同样处理条件的细胞)

做5板,因为要检测5个时间点。检测完一板丢掉一版。

Cell proliferation assay Cellswereseeded(4,000/well)andmaintainedin96-wellplates.For determination of cell proliferation, a Cell-Counting Kit 8 (CCK8; Dojindo) was used according to the user manual. Fluorescence (450 nm) was recorded in a microplate reader.

细胞一般种3k~4k
不同细胞系要种不同的细胞数

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