不知不觉一周都过去啦,今天已经是学习小组的最后的一天
还是先上今天的思维导图
由于目前二代测序的重要地位,所以把二代测序的原理和步骤再详细的介绍一下
DNA待测文库构建
利用超声波把待测的DNA样本打断成小片段(200-500bp),在两端添加上不同的接头,构建出单链DNA文库。
Flowcell
每个Flowcell有8个channel,channel的表面都附有很多接头,这些接头能和建库过程中加在DNA片段两端的接头相互配对,所以flowcell能吸附建库后的DNA
桥式PCR扩增与变性
以Flowcell表面所固定的接头为模板,进行桥形扩增,经过不断的扩增和变性循环,最终每个DNA片段都将在各自的位置上集中成束,每一个束都含有单个DNA模板的很多分拷贝,进行这一过程的目的在于实现将碱基的信号强度放大,以达到测序所需的信号要求。
测序
测序方法采用边合成边测序的方法。向反应体系中同时添加DNA聚合酶、接头引物和带有碱基特异荧光标记的4中dNTP(3’-OH被化学方法所保护),因而每次只能添加一个dNTP,接着加入激发荧光所需的缓冲液,用激光激发荧光信号,记录并利用计算机分析将光学信号转化为测序碱基,最后加入化学试剂淬灭荧光信号并去除dNTP 3’-OH保护基团,以便能进行下一轮的测序反应。
分享一篇2017年发表于Nature的测序Review
《DNA Sequencing at 40: Past, Present and Future》
最后引用一下,三篇非常优秀的链接
测序的世界
测序发展史:150年的风雨历程
测序技术原理及常用数据格式简介
So 跟着花花和小泽老师一周的学习 nice ending (●'◡'●)