常用的Elisa法有双抗体夹心法和间接法,前者用于大分子抗原,后者用于测定特异抗体。
选择Elisa试剂盒需要考虑哪些方面?
1.首先是确定要检测的靶标蛋白,并通过数据库资料查询在样本中的表达水平,这点在对比试剂盒的时候需要确定试剂盒的检测范围是否满足要求。
2.明确试剂盒的应用种属和检测的样本类型。除试剂盒特殊说明外,一般情况下,不同种属不能通用。常见的待测样本类型有:血清、血浆、细胞上清、组织匀浆、细胞裂解液等。实验前,需要判断试剂盒能否满足目标物种的目标蛋白检测。
Elisa试剂盒的8大质控标准
1、稀释线性:指样本稀释线性,即:将样本梯度稀释,看各稀释梯度浓度是否呈线性;对于高浓度样本,建议选择OD值落在标曲范围中部的稀释倍数为最佳稀释倍数。
2、回收率:评估试剂盒测量结果趋于真实值程度的指标。一般添加标准品(重组蛋白)到天然样本基质内,进行测定。通常,线性及回收率的范围在80%-120%比较合适。
3、样本值:确保试剂盒可以检测天然样本的类型。可根据靶蛋白性质对天然样本进行选择,例如,血清、血浆、细胞上清、尿液、唾液组织匀浆液等。
4、特异性:
通过交叉反应评估试剂盒的特异性,交叉反应越小,说明试剂盒的特异性好,交叉反应小,说明试剂盒的特异性好,与同家族其他蛋白或结构类似物的交叉反应,与其他种属相同靶点蛋白或结构类似物的交叉反应,与血清中常见因子的交叉反应。
5、校准:
每个试剂盒包含的标准品都应该是高纯度的标准蛋白,用来拟合标准曲线。
6、稳定性:
判断试剂盒在规定条件下的储存时间长短的标准。一般通过热加速稳定性实验验证。将试剂盒在37℃条件下放置7天,与4℃条件下放置的相同产品进行比价。各项性能检测结果的偏差均应<15%。
7、精密度:试剂盒重复实验室时,误差大小的评估标准。通常用CV表示。一把情况下,批间、批内变异系数(CV)均应<15%。
8、灵敏度:试剂盒灵敏度的判定标准。最低检测限的值越低,表明试剂盒越灵敏。如果待检指标含量很低,需要选择高灵敏的Elisa试剂盒。
如何选择试剂盒?
首先需要选择满足符合种属要求,检测样本类型,检测范围在靶标蛋白水平之内试剂盒,其次根据质控标准,选择交叉反应小,灵敏度高,稳定性好的试剂盒。推荐选择品牌比较好,例如进口的ABcam,R&D,Biorbyt,国内品牌Elabscience,联科等。·