【现学现卖·protocol】噬菌体的分离(4)

Resulting Phage Phenotypes

噬菌体产生的表型

在分离噬菌体时,首先考虑的是噬菌体的宿主范围,然后是噬菌斑的形态。此外,噬菌斑形态还可以用于推断分离出的噬菌体的表型和物理特征,例如它们的大小、生命周期和降解细菌聚合物的能力等。

Altered Procedures and Their Effect on Host Range

不同的分离方案及其对宿主范围的影响

过去我们通常认为噬菌体的宿主范围很窄,但是近期很多研究表明并不是这样。很多因素可以影响噬菌体的宿主范围,比如噬菌体结合蛋白的特异性、细菌中的原噬菌体序列以及细菌的抗性机制。

最近已经开发了专门用于分离广泛宿主范围噬菌体的方法。最简单的方式就是在分离噬菌体时,在富集培养中使用多个宿主细菌。或者样品在固体和液体培养基中与不同宿主一起孵育,具体操作为:首先在固体培养基上孵育噬菌体粗提液和宿主1,然后收集噬菌斑,再与宿主2在液体培养基中共培养......

Plaque Morphology Indicates Diverse Phage Characteristics

噬菌斑形态体现噬菌体特征

噬菌斑是噬菌体的宏观表现,斑块的形成可以分为四个阶段,病毒粒子的吸附、病毒的第一轮复制、裂解区域的扩大和噬菌斑的成熟。噬菌斑是噬菌体内在特性的体现,但是外部培养特征也会影响噬菌斑形态,比如培养基、渗透压、琼脂类型和浓度、琼脂厚度、培养时间和温度、湿度、宿主接种物的数量和生理状态等。所以如果试验需要进行比较,最好保持外部条件的一致。在观察和比较噬菌斑时,应考虑噬菌斑大小、清晰度、光晕的存在等。


图1. 同一培养条件、同一宿主时,不同噬菌体产生的噬菌斑的形态。左图表明该噬菌体感染效率低下,可能是由于病毒的吸附效率低下或病毒为溶原性侵染等;右图感染效率高,可能是烈性噬菌体产生的。

噬菌斑的大小可能与病毒粒子的大小和吸附能力有关,一般小颗粒扩散较快。

噬菌斑的清晰程度可表示噬菌体裂解宿主的效率,透明的噬菌斑表示噬菌体可高效裂解宿主,浑浊的噬菌斑表明裂解效率低下。一些温和噬菌体的溶原侵染也会产生浑浊的噬菌斑,并且一般这样产生的浑浊的噬菌斑的中心会比外缘更加浑浊。然而浑浊的噬菌斑并不是温和噬菌体的监测指标,有的温和噬菌体也可以产生非常清晰的噬菌斑。

噬菌斑的另一个重要特征是光晕,即在噬菌斑外缘的明显晕圈,其浑浊程度比噬菌斑中心高,通常不是渐变的。晕圈与胞外多糖解聚酶的存在相关,这些酶由噬菌体编码以降解生物膜等物质。不过也不是所有可以产生这些酶的噬菌体都会产生具有此类典型晕圈结构的噬菌斑。

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