小白日记第一天,记录一下自己查找motif的步骤,以便日后忘记了再重学。之前也用过许多软件,都是在要用的时候上网上各种搜索操作步骤,边学边用,只顾获得结果了,从未意识到要将操作步骤整理下来,以致于到下次再用之时,又要重头学起,再走一遭曾经走过的弯路。幡然醒悟那样的费时费力,于是便逼迫自己养成及时整理的习惯,下次再用之时便能节省些时间。
一、序列处理
将所获得的序列在NCBI网站上进行ORF预测(网址:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/),然后选定目标ORF区并下载相应的蛋白序列,具体操作如下图1和图2。
在图2界面左下角点击smart blast(图3),可获得与目标蛋白序列比对相似度较高的其它物种的蛋白序列,勾选相应的参比蛋白序列,下载下来(图4)。
将目标蛋白序列与下载的参比蛋白序列全部整合到一个文本文件里,序列保持fasta格式。(我是在DNAMAN里进行的,将所有的序列复制粘贴进去,然后保存时选择保存为所有格式,之后用记事本打开即可。简单操作可直接复制粘贴到记事本里即可)。
二、查找motif
进入meme网站(网址:http://meme-suite.org/tools/meme),按下图5所标示步骤操作即可。注意:步骤2中选择的文本文件不能仅含有一个蛋白序列,至少需要两个序列,否则提交后会出现“序列太少”提示,网站将不查找。
三、查找结果展示
点击邮箱中收到的链接便可查看查找结果,我打开的是以HTML格式展示的结果,如下图6所示。
虽然获得了结果,但是似乎有种没有完全弄明白的感觉。