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  • @冻春卷 请问 t载体测序后,所有测序结果都相同,才能认定为是纯合子吗?

    CRISPR-Cas9基因编辑7--测序验证敲除

    前言: 使用挑单克隆技术得到多个单克隆细胞系后,就要开始验证敲除,除了蛋白表达水平的检测,最终还是要看测序结果。关于测序的方案也是各有不同,由于之前选用的是CRISPR-Ca...

  • @冻春卷 你好,如果是纯合子,是否在PCR产物测序的时候就能判断,比如测序结果为单峰且有突变?

    CRISPR-Cas9基因编辑7--测序验证敲除

    前言: 使用挑单克隆技术得到多个单克隆细胞系后,就要开始验证敲除,除了蛋白表达水平的检测,最终还是要看测序结果。关于测序的方案也是各有不同,由于之前选用的是CRISPR-Ca...

  • 标记基因,报告基因傻傻分不清?

    什么是标记基因?什么是报告基因? 标记基因(marker gene)是一种能够起特异性标记作用的基因。其实就是一种已知功能或已知序列的基因,能够起着特异性标记的作用。在基因工...

  • 120
    重组质粒的构建(含引物设计)

    本文以白细胞介素6为例,介绍基因工程重组质粒构建的一般步骤。 1.准备 本文使用到的两个软件为Vector-NTI-Advance和snapgene: Vector-NTI-...

  • 你好,请问引物设计过程中,Primer Pair Specificity Checking Parameters这一部分参数是否需要设置?

    CRISPR-Cas9基因编辑2--gRNA设计(下)

    简介和前期文章 我对之前的所有教程进行了再次详细的总结CRISPR-Cas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计(上) 前言: 在上一次文章中,我们已经得到了在线工具设计的sgR...

  • 请问这里用到的primer是准备工作中sgRNA+primer里设计的?对吗?

    CRISPR-Cas9基因编辑5--不可或缺的sgRNA活性预实验

    前言: 大家都知道CRISPR-Cas9有脱靶效应,并且每个sgRNA的效率都不一样的,因此在做正式实验之前,我们要验证sgRNA的效率,之后优中选优。还是那句话,同样的目的...

  • 在这一阶段,除了WB,还有什么方法可以可以验证蛋白表达情况?

    CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录(7)验证敲除--WB

    前期记录 先确定目标基因CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录(1)然后对目的基因进行背景调查CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录(2)磨刀不误砍柴工设计sgRNA及引...

  • 您好!最后出来的引物应该有很多对吧?那要怎么进行选择了?

    CRISPR-Cas9基因编辑2--gRNA设计(下)

    简介和前期文章 我对之前的所有教程进行了再次详细的总结CRISPR-Cas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计(上) 前言: 在上一次文章中,我们已经得到了在线工具设计的sgR...

  • 谢谢春卷同学,看了你的文章,收获颇多!有个问题想请教你,我现在用CRISPR-Cas9系统进行基因敲除,用的慢病毒感染的方法,不准备挑单克隆,那么在病毒感染目的细胞后,怎么验证蛋白敲除效果?(没有抗体,无法进行WB)是不是只需要做(1)基因组DNA提取后PCR-(2)纯化PCR产物-(3)送测序 就可以了?

    CRISPR-Cas9基因编辑7--测序验证敲除

    前言: 使用挑单克隆技术得到多个单克隆细胞系后,就要开始验证敲除,除了蛋白表达水平的检测,最终还是要看测序结果。关于测序的方案也是各有不同,由于之前选用的是CRISPR-Ca...

  • 请问这个培训班在哪里报名呢?

    什么?报名国家注册营养师

    大家好,我是凤超,你身边的高效人生教练,学好时间管理和精力管理,过超然人生! 这周我为学习营养健康知识又向前迈进了一步,我报名参加了国家注册营养师! 在报名注册营养师之前,我...