@冻春卷 哈哈哈我的意思就是说，三种方法都有优劣~没有完美的办法，实验室做哪个方便做哪个。以前我也是限制条件很死，后来发现如果这样难度就会几何倍数升高。
CRISPR-Cas9基因编辑4--确定Cas9质粒构建成功+漂亮的质粒转染简介和前期文章 我对之前的所有教程进行了再次详细的总结CRISPR-Cas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计（上）[https://www.jianshu.com/p/e5c...
发简信
IP属地：四川
-
-
我觉得T4 PNK最好留着。T4 PNK也便宜。如果按合成引物的方法，没有额外加磷酸化修饰，5‘端是-OH，不好连，效率不高。如果用T4 PNK 5’的OH变成磷酸基团，磷酸二酯容易形成
CRISPR-Cas9基因编辑3--sgRNA-Cas9质粒构建
简介和前期文章 我对之前的所有教程进行了再次详细的总结CRISPR-Cas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计（上）[https://www.jianshu.com/p/e5c...
-
可以ddH2O退火就行了双链。
CRISPR-Cas9基因编辑3--sgRNA-Cas9质粒构建
简介和前期文章 我对之前的所有教程进行了再次详细的总结CRISPR-Cas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计（上）[https://www.jianshu.com/p/e5c...
-
其实我觉得分选出转染进去的方法对细胞都有影响。过流式的时候单个细胞，单个细胞其实对胚胎干影响挺大的；puro就是有药物影响；电转损伤大。不过电转有个优点哈哈哈，那就是活下来的单克隆生长比较容易
CRISPR-Cas9基因编辑4--确定Cas9质粒构建成功+漂亮的质粒转染
简介和前期文章 我对之前的所有教程进行了再次详细的总结CRISPR-Cas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计（上）[https://www.jianshu.com/p/e5c...
-
@冻春卷 FACS筛成本高了点~而且FACS要排队，很不好排
CRISPR-Cas9基因编辑6--挑单克隆技术哪家强
前言： 挑选到满意的sgRNA之后，就要开始正式实验，而正式实验中细胞转染部分我则不会再讲，直接到最关键的部分：挑取单克隆。 实验正文 1. 实验准备 常规试剂、仪器：转染试...
-
我思前想后决定用Puro抗性质粒，我一个同学和我说用puro真核抗性的话，单克隆比较好挑，因为活下来的很少😂
CRISPR-Cas9基因编辑6--挑单克隆技术哪家强
前言： 挑选到满意的sgRNA之后，就要开始正式实验，而正式实验中细胞转染部分我则不会再讲，直接到最关键的部分：挑取单克隆。 实验正文 1. 实验准备 常规试剂、仪器：转染试...
-
@春卷00 好的呀👌
菜鸟第一步，跪在数据处：R语言读取数据
1. 温故知坑 实践是学习知识的最好途径。之前我讲的内容都非常非常基础，包括： （1）什么是R语言？R语言和Rstudio软件的安装，Rstudio的界面介绍；（2）R语言的...
-
@春卷00 我平时也用的EDTA/DPBS传代~我准备后面用Dispase或者Accutase拿来消化单细胞~之前我看了一篇论文说Tyrp和Accutase不如Dispase，我也不知道真假~反正都有手上哈哈哈
菜鸟第一步，跪在数据处：R语言读取数据
1. 温故知坑 实践是学习知识的最好途径。之前我讲的内容都非常非常基础，包括： （1）什么是R语言？R语言和Rstudio软件的安装，Rstudio的界面介绍；（2）R语言的...
-
@春卷00 😬😬谢谢啦
菜鸟第一步，跪在数据处：R语言读取数据
1. 温故知坑 实践是学习知识的最好途径。之前我讲的内容都非常非常基础，包括： （1）什么是R语言？R语言和Rstudio软件的安装，Rstudio的界面介绍；（2）R语言的...
-
@春卷00 可否再打扰你一下~流式过程中要打成单细胞，请问你加什么东西可以阻止细胞自动成团呀~
菜鸟第一步，跪在数据处：R语言读取数据
1. 温故知坑 实践是学习知识的最好途径。之前我讲的内容都非常非常基础，包括： （1）什么是R语言？R语言和Rstudio软件的安装，Rstudio的界面介绍；（2）R语言的...
-
@春卷00 🤗过几天试剂到了就要开干了😭😭还好有公用的celigo不然可能会哭😬😬但素celigo在外面的屋子担心污染😂😂只有抗生素整起
菜鸟第一步，跪在数据处：R语言读取数据
1. 温故知坑 实践是学习知识的最好途径。之前我讲的内容都非常非常基础，包括： （1）什么是R语言？R语言和Rstudio软件的安装，Rstudio的界面介绍；（2）R语言的...
-
@春卷00 😳😳大佬，我突然想到一个问题，最后96孔板选克隆的时候岂不是要跑很多很多pcr?
菜鸟第一步，跪在数据处：R语言读取数据
1. 温故知坑 实践是学习知识的最好途径。之前我讲的内容都非常非常基础，包括： （1）什么是R语言？R语言和Rstudio软件的安装，Rstudio的界面介绍；（2）R语言的...
-
@春卷00 😬😬😬感谢春卷的帮助，我之前找到了好几本springer的 实验手册，还有其他的书籍，很感谢大佬，大佬能否私信我一个您的联系方式，作为感谢发给你🤗🤗🤗
菜鸟第一步，跪在数据处：R语言读取数据
1. 温故知坑 实践是学习知识的最好途径。之前我讲的内容都非常非常基础，包括： （1）什么是R语言？R语言和Rstudio软件的安装，Rstudio的界面介绍；（2）R语言的...
-
@春卷00 😬😬大佬原谅我死皮赖脸又来了，你用lipo转esc的时候铺板是用的matrigel还是vitronectin还是gelgrex，我看官网的protocol用的vitronectin
菜鸟第一步，跪在数据处：R语言读取数据
1. 温故知坑 实践是学习知识的最好途径。之前我讲的内容都非常非常基础，包括： （1）什么是R语言？R语言和Rstudio软件的安装，Rstudio的界面介绍；（2）R语言的...
-
我推荐Springer有一套r语言的书，挺好用的，ps上面那个科研难道爆也是我
为什么学R语言那么难？
先放一张自己画的美图镇楼 1. 因为压根就没办法开始呀！ 你有看过R语言相关书籍吗？我很想看，可是字都认识，却不知道ta在讲什么。那没看书，有看过教学视频吗？打开了教学视频，...
-
@春卷00 😬😬哇太谢谢你了！要是你在成都我请你吃饭！
菜鸟第一步，跪在数据处：R语言读取数据
1. 温故知坑 实践是学习知识的最好途径。之前我讲的内容都非常非常基础，包括： （1）什么是R语言？R语言和Rstudio软件的安装，Rstudio的界面介绍；（2）R语言的...
-
@春卷00 😬😬麻烦再打扰一下春卷大佬，请问一下你们筛单克隆用96孔板嘛，一个孔板大概能活几个孔呀
菜鸟第一步，跪在数据处：R语言读取数据
1. 温故知坑 实践是学习知识的最好途径。之前我讲的内容都非常非常基础，包括： （1）什么是R语言？R语言和Rstudio软件的安装，Rstudio的界面介绍；（2）R语言的...
-
CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录（2）磨刀不误砍柴工接前 CRISPR/Cas9基因敲除实验全记录（1）[https://www.jianshu.com/p/f9ed2e8fed6c]上周我写了挑选靶基因的相关工作，但仅仅是查...
